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液相色譜的發(fā)展歷史

點(diǎn)擊次數(shù):3585次  更新時(shí)間:2017-06-08
1960年代,由于氣相色譜對(duì)高沸點(diǎn)有機(jī)物分析的局限性,為了分離蛋白質(zhì)、核酸等不易氣化的大分子物質(zhì),氣相色譜的理論和方法被重新引入經(jīng)典液相色譜。1960年代末科克蘭(Kirkland)、哈伯、荷瓦斯(Horvath)、莆黑斯、里普斯克等人開(kāi)發(fā)了世界上*臺(tái)液相色譜儀,開(kāi)啟了液相色譜的時(shí)代。液相色譜使用粒徑更細(xì)的固定相填充色譜柱,提高色譜柱的塔板數(shù),以高壓驅(qū)動(dòng)流動(dòng)相,使得經(jīng)典液相色譜需要數(shù)日乃至數(shù)月完成的分離工作得以在幾個(gè)小時(shí)甚至幾十分鐘內(nèi)完成。
工科學(xué)生zui常使用的液相色譜的參考書(shū)籍1971年科克蘭等人出版了《液相色譜的現(xiàn)代實(shí)踐》一書(shū),標(biāo)志著液相色譜法 (HPLC)正式建立。在此后的時(shí)間里,液相色譜成為zui為常用的分離和檢測(cè)手段,在有機(jī)化學(xué)、生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥物開(kāi)發(fā)與檢測(cè)、化工、食品科學(xué)、環(huán)境監(jiān)測(cè)、商檢和法檢等方面都有廣泛的應(yīng)用。液相色譜同時(shí)還極大的刺激了固定相材料、檢測(cè)技術(shù)、數(shù)據(jù)處理技術(shù)以及色譜理論的發(fā)展。
1960年代前,使用的填充粒大于100μm,提高柱效面臨著困境,后來(lái)的研究人員便采用微粒固定相來(lái)突破著一瓶頸。科克蘭、荷瓦斯制備成功薄殼型固定相,這種在固定相在玻璃微球表面具有多孔薄殼,實(shí)現(xiàn)了高速傳質(zhì),為液相色譜技術(shù)的發(fā)展奠定了穩(wěn)固的基礎(chǔ)。隨著填料粒徑的降低,更高的柱效也得以實(shí)現(xiàn)。1960年代研制出氣動(dòng)放大泵、注射泵及低流量往復(fù)式柱塞泵,但后者的脈沖信號(hào)很大,難以滿足液相色譜的要求。1970年代,往復(fù)式雙柱塞恒流泵,解決了這一問(wèn)題。1970年代后科克蘭制備出全多孔球形硅膠,平均粒徑只有7μm,具有*的柱效,并逐漸取代了無(wú)定形微粒硅膠。之后又制造出的鍵合固定相使柱的穩(wěn)定性大為提高,多次使用成為可能。1970年后,適合分離生物大分子的填料又成為研究的熱點(diǎn)。1980年后,改善分離的選擇性成為色譜工作者的主要問(wèn)題,人們?cè)絹?lái)越認(rèn)識(shí)到改變流動(dòng)相的組成事提高選擇性的關(guān)鍵。
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